前言
“核心技术求真、服务质量取胜”是北京共赢联盟中心实验室始终坚持的经营理念，随着硬组织病理制片的需求不断增多，我们在服务过程中遇到的问题也越来越多，为了能够更好的服务客户，我们将沟通中客户遇到的一些问题进行了汇总，并以Q&A的形式展现，今后我们会定期收集问题并以Q&A方式解答，如果本篇内容对您有所帮助，希望您可以分享给您的朋友。 技术问答 一前期标本处理篇：
(资料图)
关于硬组织制片，知道这些的人，
效率提升80%以上！
1、问：样本取材以后可以放在-80度冰箱冷冻保存吗？
答：样本取材以后可以直接放在-80度冰箱冷冻保存。不用固定，取材以后立即冻存，这样保存1-2个月，不要反复冻融。但是最好的方法是取材后尽快固定处理。
2、问：关于样本编号如何标注？
答：请一定清晰工整的将标本编号，标注在承装标本的容器上，并附上电子编辑或打印的编号。
3、问：带液体的组织如何快递？
答：如因液体快递不能邮寄，可用沙布完全浸湿10%中性福尔马林，包裹住组织样本放入容器中寄出。
4、问：样本取材后采用哪种固定液比较好？
答：一般情况下尽量用10%中性福尔马林固定，组织与固定液的比例应为1:9。如需采用激光共聚焦显微镜采集荧光图像，则需用70%酒精固定，固定方法与福尔马林固定液相同。对于需要Micro CT分析的样本，可以先用10%中性福尔马林固定48小时后，再用70%酒精继续固定。
5、问：取材的标本如何保存？
答：样本取材后尽快放入10%中性福尔马林中，组织与固定液的比例应为1:9。如不能尽快寄出，需要隔一天换一次新鲜固定液后，放于4℃冰箱中保存。最好是尽快邮寄，保证组织的新鲜度。
6、问：组织标本取好后如何送到您公司?
答：请将已取下的组织标本，按实验要求浸泡于相应固定液里，放置在密闭容器中通过快递或亲自送到本公司。联系方式请见官方网站。
技术问答 二关于不脱钙骨薄切片，至少要知道这几点
1、问：什么样的组织可以做不脱钙骨硬组织薄切片？
答：主要是以松质骨为主，或以非坚硬骨修复材料修复的骨组织，以及关节软骨等不脱钙骨组织。如：小鼠整个股骨、胫骨近端的冠状或矢状面纵切；或直径小于5mm，长度小于1.5cm的大鼠股骨远端，胫骨近端的骨样本。以及含不锈钢或钴铬合金材质的冠脉血管支架，支架直径小于2mm。
2、问：不脱钙硬组织薄切片实验周期及切片厚度？
答：不脱钙硬组织切片采用树脂包埋，特殊切片设备制作。针对不同的实验材料，实验周期约1-3个月，切片厚度为4-5微米。
3、问：不脱钙骨薄切片与脱钙骨切片的区别？
答：不脱钙骨薄切片主要是不经脱钙的骨组织，采用脱水浸润处理后，用特定的树脂进行包埋，使用特殊的切片机切割4-5微米的薄切片。尤其是对于注射荧光标记物的实验样本，因标记物与钙结合，不能脱钙处理，需做不脱钙骨薄切片。脱钙骨切片是指骨组织经脱钙剂脱钙处理2-8周后，经脱水浸润、石蜡包埋后制作石蜡切片。但对于需要研究矿化结果的组织，还是要做不脱钙骨切片或切磨片。
4、问：不脱钙硬组织薄切片为什么不能做亚甲基蓝酸性品红染色？
答：因为硬组织薄切的片子厚度是5微米，片子太薄，显色会过深，不利观察。亚甲基蓝酸性品红染色主要是针对不脱钙骨切磨片而设计的染色方法。
5、问：血管支架的分切方式和适用范围？
答：一般带支架血管的样本，根据实验目的需要观察近端、中段、远端三部分的结构，这需要分别包埋成三个树脂块，是否三部分都做，主要看实验目的来定。
对于含不锈钢或镍铬合金等支架材料的冠脉血管，血管直径＜2mm，可以制备厚度 5-8µm 的薄切片。但如支架丝较粗，即使是冠脉血管，也不适合制作薄切片，只能做切磨片。而对于大的带支架血管，只有制作切磨片来进行观察。染色主要为HE染色，其他特殊染色需要做预试验。
技术问答 三关于硬组织磨片，看这里就可以
1、问：骨组织脱水需要注意什么？
答：因骨组织基本由组织间隙，结缔组织、髓腔组织、松质骨和皮质骨等部分组成，软硬相间，结构比较复杂，同时骨组织中皮质骨硬度比较大，组织比较致密。因此对骨组织进行脱水时要注意，一方面要由低浓度酒精开始脱水，比如从40%或50%的浓度开始，且在脱水时尽量不使用无水乙醇等强脱水剂，因这些脱水剂使用后会增加骨组织的硬度，在经二甲苯等透明剂透明后，使骨组织的硬度更大，不利于制片。另一方面，建议对于以皮质骨为主的骨组织透明时，使用收缩性稍弱的脱水剂，如正丁醇、氯仿等可以兼顾脱水、透明双重作用的透明剂代替二甲苯，效果会更好。
2、问：硬组织磨片实验周期及厚度？
答：硬组织磨片的一般制作周期为2-3个月，有些小组织因脱水时间较短，一个半月可以完成制片。但对于大块组织，或含有较大植体的样本制作时间需要加长。硬组织切磨片一般采用树脂包埋，制片厚度在25微米左右。
3、问：为什么硬组织磨片制作周期较长？
答：因制作硬组织切磨片，组织不能脱钙，且多数都含有植入材料，厚度较一般脱钙骨要厚，因此其脱水及浸润时间会比脱钙骨组织要长。另外，制作硬组织切磨片，工序较多，要求较高，且有些植入材料因其硬度或韧性较大，切磨时间会延长。而普通石蜡切片，因其硬度已很小，一般包埋好的组织每块半小时就可以完成制片。所以硬组织切磨片与普通石蜡切片在处理及制片流程上有较大差别，使得硬组织切磨片的制作周期较长。但如人为的加快或缩短制作和处理周期，会极大影响最终的制片质量。
4、问：哪些标本可以制作硬组织切磨片？
答：应该说，对于含有金属、陶瓷、塑料、纤维、成骨材料、带金属支架血管，不能脱钙的骨组织、牙齿等标本都需制作硬组织切磨片。这些材料在植入组织后因其实验整体性研究的要求，不能从组织内取出植体后再脱钙，且有些材料在取出后会导致组织的碎裂，所以必须通过制作带植体的切磨片，并进行相关染色来完成组织结果的观察。
5、问：组织植入材料有哪些特殊材质，都有什么特点？
答：（１）纯钛材料因其粘性较大，在切割时会发生震动，使植体与组织发生分离，因此切片时速度不要太快；
（２）对于镁或镁合金材料，因其金属活泼性，在使用酸性染色剂染色时，植入材料会发生部分或全部溶解，出现植体变小或者植体消失，因此多采用一些不含酸的染色剂，如甲苯胺兰、亚甲基蓝酸性品红、VG等染色方法；
（３）二氧化锆、碳化硅等材料因过于坚硬，制作磨片周期较长，且费用较高。
（４）有些高分子复合材料，因其合成试剂与部分脱水、透明或浸润试剂发生反应，在脱水处理过程中发生材料的部分或全部溶解。因此，对于含有此类植入材料的组织，最好提前对材料做预试验，选择合适的脱水剂，避免造成样本损失。
技术问答 四关于硬组织切磨片，你可能想知道这些
1、问：硬组织包埋块可以保存多久？
答：没有切开的包埋块可以长期保存。但是切开的包埋块，由于部分组织暴露在空气中，随着时间的加长，可能会有组织开裂的现象出现，最终影响制片的效果。
2、问：硬组织切磨片染色封片后的片子可以保存多久？
答：可以永久保存，但是随着时间的加长，有些染色结果可能会有褪色。所以建议尽早进行切片的图像采集保存工作。
3、问：硬组织磨片主要针对的样本？
答：硬组织磨片主要针对不脱钙骨组织、牙齿及带植入材料的组织样本。特别是对于以皮质骨为主的骨组织，脱钙后组织结构有严重破坏或变形的组织，植入高分子材料、陶瓷材料以及金属材料的组织标本，必须通过制作切磨片才能完成样本切片。
4、问：血管支架的分切方式？
答：一般一根血管支架的样本，按实验要求需要制作近端、远端、中段三部分的切磨片，制作时需要分别包埋为三个树脂块。
5、问：硬组织切磨片都可以进行哪些染色？
答：原则上能应用于软组织或脱钙骨的染色方法都可以用于硬组织切磨片的染色，但因其是树脂包埋，且多数情况下不能脱塑，在染色效果上以及具体染色实践上与普通切片会有所差别。针对于切磨片常用的染色方法主要有HE染色，甲苯胺蓝染色，VG染色，von kossa染色，goldner三色染色等几种。对于硬组织切磨片的免疫组化染色，因制作难度大，且为不连续切片，成功率较低。目前艾佧科技对于磨片的免疫组化染色正在研发中。
技术问答 五你可能需要知道的，
关于软组织和脱钙骨石蜡切片技术问答
1、问：软组织和脱钙骨石蜡包埋块可以保存多久？答：石蜡包埋块可以永久保存。 2、问：骨组织是否可以快速脱钙？答：快速脱钙一般是采用稀释后的强酸作为脱钙剂进行脱钙。因利用酸性试剂进行快脱，可能会导致部分组织过度脱钙，造成组织结构不全。另外，采用酸性脱钙剂，也会影响后期染色效果，比如HE染色，细胞核着色较浅。因此，骨组织不建议做快脱处理，特别是要进行免疫组化研究的实验。建议采用混合酸或稀释的甲酸作为脱钙液。如果时间允许，最好是使用EDTA脱钙液进行脱钙，效果会更好。 3、问：软组织和脱钙骨切片的包埋方式及厚度？答：采用石蜡包埋，切片厚度是3-5微米。 4、问：脱钙骨实验周期？答：脱钙骨实验周期在2-3个月（包括脱钙及脱水浸润时间），根据骨组织结构及大小不同会有所区别。采用EDTA脱钙，脱钙时间大约为4-8周，如果骨组织较大，或皮质骨较多的组织，脱钙时间会更长一些。 5、问：软组织石蜡切片实验周期？答：软组织石蜡切片实验周期一般在1-2周左右，实验要求比较简单的标本最快2-3天就可以完成。咨询电话（微信同号）：
邹经理 18610177707
高经理 18515003551
END关于艾佧
三孩政策实施后 多地密集发布生育支持政策！